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高效液相色譜法測定三聚氰胺

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高效液相色譜法測定三聚氰胺

2020-06-27 08:43:52

高效液相色譜法測定雞蛋中的三聚氰胺



摘 要:建立采用固相萃取凈化,高效液相色譜法測定雞蛋中三聚氰胺含量的方法。樣品采用三氯乙酸和乙酸鉛溶液提取,優化樣品提取時間、色譜柱及固相萃取柱,最終確定為樣品提取20min、采用TC-C18(4.6mm× 150mm,5μm)色譜柱和PCX 固相萃取柱。采用紫外檢測器,檢測波長為240nm,流動相為乙腈:辛烷磺酸鈉- 檸檬酸緩沖液(10:90,V/V),流速1.0mL/min,進樣量20μL,外標法定量。三聚氰胺在1~50μg/mL 范圍內,具有良好的線性關系(R2=1),在添加質量濃度為5~20mg/kg 范圍內,三聚氰胺添加回收率在72.8%~87.6%,RSD(n=6)為1.5%~4.0%,最低檢測限為0.54mg/kg。
    三聚氰胺(melamine)簡稱三胺,學名三氨三嗪,別名蜜氨、氰尿酰胺、三聚酰胺,微溶于水及乙醇,不溶于醚、苯和四氯化碳。在一般情況下較穩定,但在高溫下可能會分解放出氰化物[1]。三聚氰胺的含氮量為66.6%,折合粗蛋白含量為416.27%,因此,不法商販將其摻入蛋白性飼料或食品中提高蛋白質測定含量,降低成本。有人估算在植物蛋白粉和飼料中使測試蛋白質含量增加一個百分點,用三聚氰胺的花費只有真實蛋白原料的1/5。三聚氰胺對哺乳動物低毒,但長期吸收到體內,會導致體重降低、膀胱結石、結晶尿癥。世界衛生組織(WHO)[2]報道,因為三聚氰胺容易和人體內氰脲酸(即三聚氰酸)反應生成晶體狀聚合物,而引起結石等病狀,嚴重影響人類健康。2007 年3 月中旬以來,美國發生了寵物食品三聚氰胺污染事件,2008 年國內發生了三鹿奶粉事件,且在出口香港的雞蛋中也檢測出了三聚氰胺,因此,建立和完善飼料和食品中的三聚氰胺的檢測方法,勢在必行。目前針對飼料和牛奶中三聚氰胺的測定我國農業部和國家質檢總局先后于2007 年法包括高效液相色譜法、氣相色譜- 質譜法( g a s chromatogrophy-mass spectrometry,GC-MS)、液相色譜- 串聯質譜法( l i q u i d c h r om a t o g r a p h y -m a s s spectrometry,LC-MS/MS)等。但是飼料和食品的其他不同基質的相應測試方法的國家標準和地方標準還沒有出臺,雞蛋中三聚氰胺的測定方法,亦未見標準出臺。目前,針對飼料和食品不同基質的測定方法已見報道。Wang 等[5]采用酶聯免疫法測定豬、雞組織及體液中的三聚氰胺,針對液態奶、奶粉、飲料等食品以及魚、雞、豬組織等動物性食品,人尿液、小鼠血漿、組織中的三聚氰胺的測定不同學者[6-11]建立了LC-MS/MS法,對于雞蛋中三聚氰胺的檢測方法,陳義強等[12]建立了氣相色譜- 質譜法;Xia 等[13]建立GC-MS/MS 與UPLCMS/MS(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry)法,Xu 等[14]通過應用新型離子交換樹脂凈化雞蛋建立了LC-MS/MS 法,Chou 等[15]采用高效液相色譜法測定了禽肉、蛋中的殺蟲劑及其代謝物三聚氰胺,并采用GC-MS 法確證。GC-MS/MS、LC-MS/MS與HPLC 相比靈敏度高、選擇性好,但GC-MS 需要衍生化,過程比較繁瑣,且前兩種方法成本高儀器設備昂貴,一般作為確證的方法,而高效液相色譜法由于無需衍生化成本低且儀器設備較普及是目前最為常用的檢測方法和初篩方法。本實驗主要在農業部行業標準NY/T1372 — 2007《飼料中三聚氰胺的測定》[3]的基礎上,通過比較不同類型的色譜柱、固相萃取柱和樣品提取時間建立雞蛋中三聚氰胺的高效液相色譜檢測方法,并采用LC-MS/MS 法確證。同時,應用紫外光譜對不同濃度的三聚氰胺標準品進行最大波長掃描,并測定三聚氰胺的總能,為全面了解三聚氰胺的性質提供基礎數據。


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